鼻咽癌中Epstein-Barr病毒編碼的潛伏膜蛋白1（LMP1）對β-catenin轉錄活性及表達的影響.pdf

1、中山大學碩士學位論文鼻咽癌中EpsteinBarr病毒編碼的潛伏膜蛋白1（LMP1）對βcatenin轉錄活性及表達的影響姓名：游淑源申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學指導教師：韓安家20080516鼻咽癌中EpsteinBarr病毒編碼的潛伏膜蛋白1(LMPl)對Bcatenin轉錄活性及表達的影響方法：(1)、應用RTPCR方法擴增B95—8細胞株LMPl的cDNA片段，經基因克隆至pHA2載體，構建pHA2LMPl重組質粒；采用Lip

2、ofectamine2000轉染試劑，將重組質粒瞬時轉染至鼻咽癌細胞，檢測LMPl蛋白表達。(2)、應用細胞免疫熒光、雙熒光素酶報告分析檢測LMPl對不同分化程度鼻咽癌細胞株13catenin核表達及其轉錄活性的影響；應用Westernblot方法檢測LMPl對不同分化程度鼻咽癌細胞株13catenin及P27蛋白表達水平的影響；應用免疫組織化學方法檢測鼻咽癌組織中LMPl與13catenin表達之間的相關關系。結果：(1)、重組質粒陽

3、性克隆的測序結果與OenbankB958細胞株報告序列一致；將重組質粒DNA瞬時轉染鼻咽癌細胞，轉染后24小時收集蛋白進行Westernblot可檢測到目的蛋白HALMPl的表達。(2)、細胞免疫熒光顯示LMPl表達明顯提高鼻咽癌細胞株CNEl和CNE2中13catenin的核表達。另外，Bcatenin的核表達在低分化鼻咽癌細胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細胞株CNEl。(3)雙熒光素酶報告分析結果顯示：轉染LMPl可明顯上調CNEl和

4、CNE2中13一catenin的轉錄活性，且呈時間依賴性。另外，13一catenin的轉錄活性在低分化鼻咽癌細胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細胞株CNEl。(4)、Westemblot結果顯示：轉染LMPl對鼻咽癌細胞株13catenin的總蛋白表達水平無明顯影響；但可下調P27表達水平。(4)、免疫組織化學結果顯示：鼻咽癌組織中異常表達13一catenin與LMPl的表達存在正相關，具有統(tǒng)計學意義(pO05)。結論：1)首次發(fā)現LMPl

5、表達能明顯提高鼻咽癌細胞株13catenin的核表達及其轉錄活性，且呈時間依賴性。13catenin的核表達及其轉錄活性在低分化鼻咽癌細胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細胞株CNEl；2)本實驗顯示轉染LMPl對鼻咽癌細胞株Bcatenin的總蛋白表達水平無明顯影響。3)LMPl表達可下調鼻咽癌細胞株P27表達水平。4)鼻咽癌組織中LMPl表達與13catenin的異常表達存在明顯的正相關。提示EB病毒編碼的LMPl可能通過13cateni