RYR2基因G1885E,G1886S位點多態(tài)性與不明原因心臟性猝死的相關性探索.pdf

1、【研究背景】鈣離子在維持心臟正常節(jié)律和興奮-收縮耦聯中發(fā)揮重要作用。RYR2基因編碼心肌細胞肌漿網Ca2+釋放通道-雷諾定受體2(Ryanodinereceptor2,RyR2),該基因的突變引起RyR2通道舒張期肌漿網Ca2+泄露增加,引發(fā)心肌細胞Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡,從而導致致死性心律失常。大量研究表明致心律失常性右心室心肌病(Arrhythmogenicrightventricularcardiomyopathy,ARVC)和兒茶酚胺

2、性多形性室性心動過速(Catecholaminergicpolymorphicventriculartachycardia,CPVT)與RYR2基因變異存在相關性,而CPVT與ARVC患者平常可無明顯臨床癥狀和體征,約50％患者以暈厥和猝死為首發(fā)癥狀,易引起糾紛而需進行法醫(yī)病理學尸體解剖檢查,但多數案例心臟未檢見明顯形態(tài)學異常,此類案例常被稱為不明原因心臟性猝死(Suddenunexplainedcaidiacdeath,SUD),是困

3、擾法醫(yī)病理學研究的難點之一。因此尋找一種分子病理學診斷方法,以確定上述患者的死因,對法醫(yī)病理學領域SUD的診斷及臨床上該類猝死的預防將具有重要意義。
　　【目的】通過對RyR2的功能狀態(tài)具有重要調節(jié)作用的RYR2基因2個位點(G1885E、G1886S)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)進行檢測,分析2個位點多態(tài)性及其與SUD之間的關系,以期在分子遺傳學水平對法醫(yī)病理學SUD案例的死因診斷提供依據,為臨床SUD的預防提供參考。
　　

4、【方法】嚴格按照篩選標準選取湖北同濟法醫(yī)學鑒定中心2005-2011年間不明原因心臟性猝死案例(34例)為實驗組,本中心親子鑒定室無親緣關系的健康人群(78例)為對照組;分別利用石蠟包埋組織基因組DNA提取試劑盒和全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA;選擇RYR2基因2個位點(G1885E、G1886S)為目標觀察位點,使用primerprimer5.0軟件設計包含上述2個位點在內的特異性引物;PCR擴增目的基因片段(約269bp

5、),純化后測序;運用NCBI-BLAST軟件與數據庫中已登陸的序列對上述位點進行同源性分析并提取每個位點的基因型;運用軟件SPSS17.0和Hard-WeinbergV2.0平衡檢驗進行數據統計分析。
　　【結果】(1)對照組78例樣本中,73例測序成功,5例信號弱(weaksignals);實驗組34例樣本中,29例測序成功,5例信號弱。(2)實驗組RYR2基因G1886S位點測序結果為:GG基因型89.66%(24/29),A

6、G基因型13.79%(4/29),AA基因型3.45%(1/29),其中野生型G等位基因頻率89.66%,突變型A等位基因頻率10.34%。對照組RyR2基因G1886S位點測序結果為:GG基因型98.63%(72/73),AG基因型1.37%(1/73),AA基因型0%(0/73),其中野生型G等位基因頻率99.32%,突變型A等位基因頻率0.68%。兩組之間基因型(GG、AG、AA)的分布具有統計學意義(P<0.05),等位基因頻率

7、(G、A)分布具有統計學意義(P<0.05),研究結果顯示RyR2基因G1886S位點變異與SUD之間存在相關性。(3)實驗組RyR2基因G1885E位點測序結果為:GG基因型100%(29/29),G等位基因頻率100%。對照組RyR2基因G1885E位點測序結果為:GG基因型100%(73/73),野生型G等位基因頻率100%。兩組之間基因型及等位基因頻率分布無差異及統計學意義。
　　【結論】(1)RYR2基因G1886S位點