簡介：中圖分類號UDCR7410561O碩士學位論文學校代碼Q三三3密級公玨慢病毒介導P16INK4A基因沉默對老齡脂肪間充質干細胞增殖分化能力的影響THEEFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDP16INK4ASILENCINGONPROLIFERATIONANDDIFFERENTIATIONOFAGINGADIPOSEDERIVEDMESENCHYMALSTQCELLSATLLPOSETLERIVEDSTEMCEUS作者姓名姚夢枝學科專業(yè)臨床醫(yī)學研究方向神經病學學院系、所湘雅二醫(yī)院指導教師肖志杰教授論文答辯日期三竺|三蘭答辯委員會主席中南大學二零一四年五月一令一幽，牛直月本課題項目資助湖南省自然科學基金資助2011J5043

簡介：I學校代碼10270分類號B849學號132200445碩士學位論文大學生主觀幸福感、生活事件、認知情緒調節(jié)的關系及敘事團體輔導干預研究學院教育學院專業(yè)應用心理學研究方向心理咨詢研究生姓名趙曉妍指導教師沈勇強副教授完成日期20165IIITITLETHECORRELATIONSAMONGUNDERGRADUATES’SUBJECTIVEWELLBEING,NEGATIVELIFEEVENTSANDCOGNITIVEEMOTIONREGULATIONANDNARRATIVEORIENTEDGROUPCOUNSELINGINTERVENTIONMAJORAPPLIEDPSYCHOLOGYDEGREEAPPLICANTZHAOXIAOYANRESEARCHSUPERVISORPROFESSORSHENYONGQIANGABSTRACTBSTRACTSUBJECTIVEWELLBEINGISAHOLISTICASSESSMENTOFLIVINGQUALITYACCORDINGTOSELFMADESTANDARDBYEVALUATORSITISDECIDEDBYEVALUATORS’SUBJECTIVEEVALUATION,NOTBYOUTSIDEOBJECTIVESTANDARDS,INCLUDINGBOTHCOGNITIVEANDINTERVENTIVECOMPONENTSDIENER，2000THESTUDYCOVERSTHEORETICALRESEARCHANDINTERVENTIONRESEARCH,THEORETICALRESEARCHTAKESTHECLUSTERRANDOMSAMPLINGMETHODRESEARCHERSPICKS344UNDERGRADUATESOFDIFFERENTGRADESANDDIFFERENTMAJORSOFSHANGHAINORMALUNIVERSITYTHESURVEYUSESSUBJECTIVEWELLBEINGQUESTIONNAIRESWQ,ADOLESCENTSELFRATINGLIFEEVENTSCHECKLISTASLEC,COGNITIVEEMOTIONREGULATIONQUESTIONNAIRECHINESEVERSIONCERQCTOFINDDEMOGRAPHICDIFFERENCE,EXPLORETHERELATIONSHIPAMONGUNDERGRADUATES’SUBJECTIVEWELLBEING,NEGATIVELIFEEVENTSANDCOGNITIVEEMOTIONREGULATION,STUDYWHETHERTHENEGATIVECOGNITIVEEMOTIONREGULATIONPLAYSAMEDIATINGROLEBETWEENSUBJECTIVEWELLBEINGANDNEGATIVELIFEEVENTSORNOTTHEINTERVENTIONRESEARCHDEPENDSONTHETHEORETICALRESEARCHRESEARCHERSRECRUIT8EXPERIMENTALGROUPMEMBERSAND8CONTROLGROUPMEMBERS,DESIGNANDCARRYOUTNARRATIVEORIENTEDGROUPCOUNSELINGTHEGROUPTHERAPYCONTINUESWEEKLYDURING6WEEKSTHEINTERVENTIONADOPTSNARRATIVETHERAPYTOREDUCENONADAPTIVECOGNITIVEEMOTIONREGULATION,SOTHATUNDERGRADUATES’SUBJECTIVEWELLBEINGPROMOTESSWQ,ASLEC,CERQCARETAKENBEFOREANDAFTERTHEGROUPCOUNSELINGTHERESULTSSUGGESTTHAT1THEOVERALLOFUNDERGRADUATES’SUBJECTIVEWELLBEINGISFINEINOTHERWORDS,UNDERGRADUATES’LIFESATISFACTIONISABOVEAVERAGE,POSITIVEEMOTIONISINTHEAVERAGE,NEGATIVEEMOTIONISBELOWTHEAVERAGE2UNDERGRADUATES’SUBJECTIVEWELLBEINGSHOWSSIGNIFICANTGENDERDIFFERENCESINOTHERWORDS,FEMALECOLLEGESTUDENTS’SUBJECTIVEWELLBEINGANDLIFESATISFACTIONAREBETTERTHANMALESTUDENTS’,FEMALESTUDENTS’POSITIVEEMOTIONISBETTERTHANMALESTUDENTS’,FEMALEANDMALESTUDENTS’NAGATIVEEMOTIONAREEQUALLYMATCHED

簡介：傳統(tǒng)的扶手椅哲學依賴于先驗自明的直覺的研究方法進行哲學研究，隨著實驗哲學和認知科學的興起，實驗哲學家反對只依賴于先驗自明的哲學研究方法，而是倡導結合實證與傳統(tǒng)的哲學研究方法，傳統(tǒng)的扶手椅哲學受到實驗哲學的嚴重挑戰(zhàn)。哲學家對實驗哲學家的種種挑戰(zhàn)持不同的看法，一些將直覺視為證據的哲學家提供一套建立在經驗方法基礎上的觀點，以積極為直覺進行辯護。戴維特就是其中的典型代表。在戴維特看來，扶手椅哲學家和實驗哲學家之間爭論的澄清，論證直覺在哲學中作用的可能性空間，并不是單一作用的論證類型，而是應該通過一個“工具包”來論證。戴維特從對直覺本質的邏輯分析，到對直覺的真值條件、執(zhí)行條件、建構條件等的現象學分析，將直覺的經驗基礎和實在論的方法相結合，這樣的“工具包”對于解決傳統(tǒng)哲學家和實驗哲學家之間的爭論具有重要的理論意義和方法論價值。第一章研究直覺的內涵。從現象學的視角梳理了直覺問題，詳細闡述直覺在認知哲學中的界定，在直覺認知差異性基礎上區(qū)分直覺的類別，基于直覺可靠性的認知闡釋直覺的主要特征，從而整體上把握直覺的本質特征。第二章對戴維特直覺的語義學認知思想進行全面的分析。具體論述戴維特直覺的指稱認知思想，闡明直覺的認知機制，并進一步剖析其自然主義立場和實在論立場的直覺認知思想。第三章探討直覺的意向性問題。具體分析直覺主客統(tǒng)一的意向內容，探討直覺自我與內感相統(tǒng)一的意向表征的形式，從而揭示其為意識實在論辯護的立場。第四章闡述戴維特直覺認知思想重要意義及其局限性。戴維特的直覺認知思想豐富了直覺的經驗基礎和意向性的認知思想，充分闡明其實在論的立場，為解決傳統(tǒng)扶手椅哲學與實驗哲學的爭論開辟了一條溫和的方法論路徑，具有重要的理論價值和方法論意義。同時，戴維特的直覺認知思想也存在一定的局限性。

簡介：背景與目的乙型肝炎病毒（HBV）呈世界性流行，全世界約有10億人口（每年超過5千萬以上）曾感染HBV。我國屬HBV高流行區(qū)，HBSAG的攜帶率高達10％20％，HBV感染除了會導致急慢性肝實質損傷外，近20％的慢性HBV感染患者還會出現肝外器官損害表現。其中，乙型肝炎病毒相關性腎炎（HEPATITISBVIRUSASSOCIATEDGLOMERULONEPHRITIS，HBVGN）是較為常見的肝外損害表現。目前由于我國HBV的高感染率導致的HBVGN已成為我國臨床常見的繼發(fā)性腎臟病。然而，HBVGN的發(fā)病機制尚不明確，有觀點認為其發(fā)病是由免疫介導的，并且是病毒、宿主、環(huán)境因素相互作用的結果。而國外的研究顯示HBVGN多見于兒童，且自發(fā)緩解率較高，但具體到我國，HBVGN患者占絕大多數。而成人與兒童患者的臨床表現、病理及預后不盡相同，自發(fā)緩解率低，約30％患者可進展至終末期腎病（ESRD）。此外，我國HBVGN的知曉率低，HBV相關性腎炎的診斷及治療不夠規(guī)范，治療控制率低，缺乏臨床大樣本的病例研究。綜合以上幾方面原因，我們十分需要針對HBVGN進行系統(tǒng)的臨床和病理研究，這也是本研究的出發(fā)點。本研究在總結HBVGN臨床及病理資料的基礎上，總結HBVGN的臨床病理特點，觀察HBV病毒復制與HBVGN的臨床和病例表現之間的關系，同時研究乙肝病毒相關膜性腎?。℉BVMN）與原發(fā)性膜性腎?。↖MN）的臨床病理異同點。本研究的結果將為提高HBVGN的診斷、治療提供臨床和病理的依據。材料與方法1989年～2008年解放軍總醫(yī)院收治診斷HBVGN患者253例，從中選取臨床病理資料完整，且符合北京乙型肝炎病毒相關性腎炎座談會診斷標準的病例205例。首先，我們分析這些病例自身的一些臨床病理特點其次，按照HBVDNA復制程度高低將其中135例患者分為4組，研究其臨床病例表現與HBVDNA復制程度的相關性；第三，由于HBVGN的最主要病理類型為膜性腎?。℉BVMN），我們還收集了同期解放軍總醫(yī)院腎活檢確診的143例特發(fā)性膜性腎?。↖MN）患者的臨床及病理資料，對比了HBVMN與IMN患者臨床與病理的異同。結果205例HBVGN患者中男157例（765％），女48例（245％），發(fā)病年齡365歲，平均年齡3779歲臨床表現為腎病綜合征（NS）者最為常見，占102例（498％），其次為腎炎綜合征，占71例（346％），腎功能不全者32例（156％）；155例（756％）患者合并鏡下血尿；肝功能異常與否和腎臟臨床表現及病理類型之間無明顯關系（P005）；病理表現以膜性腎病為主，占124例（605％），其次為系膜增殖性腎炎（包括IGA腎病及非IGA腎?。?，占53例（259％）和膜增殖性腎炎，占28例（137％）隨著血清HBVDNA定量的增加，HBVGN患者的尿蛋白定量升高，血漿白蛋白降低，血清C3、C4降低（P結論我國HBVGN患者以中青年為主，男性多于女性；臨床表現以NS為主，病理以MN為主，近10％的患者腎活檢時已出現腎功能不全；HBV對肝臟及腎臟的損傷不具有同步性；隨著血清HBVDNA定量的增加，HBVGN患者的臨床及腎臟病理表現有加重的趨勢。HBVMN患者既具有HBV感染的特點，又具有膜性腎病腎臟損害自身的一些特點，在臨床和病理表現方面均與IMN有差異我國為HBV高感染國家，需要防治乙型肝炎患者繼發(fā)的腎臟病，應重視定期進行乙肝患者中尿液及腎功能的檢查，有異常時必要可行腎臟病理檢查，提高HBVGN的早期診斷率及治療率。

簡介：廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經特別加以注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名三圣邋日期加陟年占月歲日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門機構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名I玉灣論文導師簽名日期汐瞬6月歹日關鍵詞七味白術散；輪狀病毒；腹瀉。

簡介：一、研究背景支氣管哮喘是氣道的慢性炎癥性、過敏性疾病，其反復發(fā)作可引起氣道重塑，近年來成為支氣管哮喘（簡稱哮喘）研究中的一個亮點。氣道重塑指的是哮喘中發(fā)生于氣道壁的結構改變，這些改變包括上皮細胞的增生和化生，上皮下纖維化，肌細胞增生和血管發(fā)生。氣道平滑肌細胞（AIRWAYSMOOTHMUSCLECELLS，ASMCS）是氣道主要的結構和功能細胞，在氣道重塑中起重要作用，哮喘時ASMC生物學特性發(fā)生很大變化，包括增生，肥大，遷移等，不僅使支氣管對刺激的收縮反應更強烈，加重氣道高反應性，而且增殖的ASMC使氣道壁增厚，導致基礎氣道阻力增加和不可逆性氣流阻塞的發(fā)生。與張力蛋白和輔助蛋白同源，第10號染色體丟失的磷酸酶基因（PHOPHATASETENSINHOMOLOGDONCHROMOSONE10，PTEN）是近年來發(fā)現的一種新的抑癌基因，是至今發(fā)現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN作為一種具有雙重磷酸酶活性的腫瘤抑制因子，在中樞神經系統(tǒng)、心臟、肝臟、腎臟、胃腸道、肺臟及皮膚等全身多器官均有表達，是一種細胞內固有表達的非分泌型蛋白。正常組織內PTEN的廣泛表達及其基礎活性的存在，提示PTEN參與了多種生理過程，對細胞的生長、增殖、分化、凋亡、黏附、遷移和血管生長等許多生物學行為有重要影響。近年來，對PTEN的研究逐漸從腫瘤領域延伸到一些非腫瘤領域中，隨著研究的深入人們發(fā)現其在如心肌肥大，高血壓動脈粥樣硬化，支氣管哮喘哮等非腫瘤性疾病中也發(fā)揮重要的作用。已有的研究已經證實PTEN可以通過對磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、細胞外信號調節(jié)激酶（ERK）及黏著斑激酶（FAK）等信號通路的抑制來抑制腫瘤細胞，心肌和血管平滑肌等細胞的增殖、遷移。P13KPKBAKT通路同時是介導ASMC增殖的主要信號傳導通路。因此我們推斷PTEN對ASMC的增殖也有類似的影響，可以通過對PI3KPKBAKT通路的抑制來抑制ASMC增殖，提高人氣道平滑肌細胞G0G1期細胞的比例，阻滯細胞周期進程。二、研究目的本實驗以體外培養(yǎng)的HASMCS為研究對象，觀察攜帶野生型PTEN基因的重組腺病毒（ADPTEN）體外轉染體外培養(yǎng)的人氣道平滑肌細胞（HASMC）后的表達，研究其對體外培養(yǎng)的HASMC增殖的影響，并對其作用機制作初步的探討，為其治療支氣管哮喘氣道重構提供實驗依據。三、材料與方法1經患者同意，取南方醫(yī)院胸外科同期做肺葉切除術患者的正常肺葉、段支氣管標本。2組織塊貼壁法培養(yǎng)人支氣管平滑肌細胞，倒置顯微鏡觀察和抗平滑肌Α肌動蛋白單克隆抗體（ΑACTIN）免疫細胞化學法進行HASMCS鑒定。3通過攜帶野生型PTEN基因的重組腺病毒（ADPTEN）體外轉染體外培養(yǎng)的人氣道平滑肌細胞構建過度表達PTEN的原代培養(yǎng)氣道平滑肌細胞模型，通過追蹤綠色熒光蛋白（GFP）的表達，檢測不同感染倍數（MOI）的感染效率，以及感染后24H，48H和72H時GFP表達陽性率，確定合適的感染倍數和病毒表達時間。4用RTPCR及WESTERNBLOT檢測受感染細胞內PTEN的MRNA及蛋白表達，檢測通過腺病毒感染介導能否有效地引起氣道平滑肌細胞內過度表達PTEN。5MTSPMS微量比色法檢測各組吸光度（OD490值）以了解HASMC的增殖情況。6各組細胞PI單染后流式細胞儀測定細胞周期分布。7WESTERNBLOT檢測各組細胞AKT及PAKT的蛋白表達。8RTPCR檢測各組細胞P21MRNA的表達。9采用SPSS130統(tǒng)計軟件進行結果分析，統(tǒng)計數據用均數±標準差（X±S）表示，組間比較用ONEWAYANOVA分析，多重比較用LSD，P005）。WESTERNBLOT檢測結果顯示，ADPTEN轉染組PTEN蛋白表達水平顯著高于ADGFP轉染組和對照組（P005）。提示攜帶外源基因PTEN的腺病毒感染氣道平滑肌細胞后，ADPTEN轉染組細胞內過度表達PTENMRNA及蛋白。4MTSPMS法檢測攜帶野生型PTEN基因的重組腺病毒（ADPTEN）轉染對HASMCS增殖的影響，結果顯示ADPTEN轉染組細胞的吸光度（OD490值）顯著低于ADGFP轉染組和對照組（P005）。5流式細胞儀檢測攜帶野生型PTEN基因的重組腺病毒（ADPTEN）轉染對HASMCS細胞周期的影響，結果顯示ADPTEN轉染組G0G1期細胞的比例顯著大于ADGFP轉染組與對照組（P005）。各組的S期及G2M期細胞比例的差異無統(tǒng)計學意義（P005）。6WESTERNBLOT結果顯示，各組細胞間總AKT水平差異無統(tǒng)計學意義（P005），而ADPTEN轉染組PAKT蛋白表達水平顯著低于ADGFP轉染組和對照組（P005）。7RTPCR同時擴增ADPTEN轉染組，ADGFP轉染組和對照組P21MRNA，結果顯示ADPTEN轉染組P21MRNA的表達水平顯著高于ADGFP轉染組和對照組（P005）。結論1通過腺病毒感染成功構建過度表達PTEN的原代培養(yǎng)氣道平滑肌細胞模型，其能有效地引起氣道平滑肌細胞內過度表達PTEN。2通過腺病毒介導的氣道平滑肌細胞內PTEN過度表達能夠抑制氣道平滑肌細胞的增殖，可提高人氣道平滑肌細胞G0G1期細胞的比例，阻滯細胞周期進程。3通過腺病毒介導的氣道平滑肌細胞內PTEN過度表達能夠對PI3KPKBAKT信號通路表現出抑制作用。4通過腺病毒介導的氣道平滑肌細胞內PTEN過度表達能夠上調CDK抑制因子P21的表達進而阻滯細胞周期進程。5PTEN過表達能有效抑制人氣道平滑肌細胞的增殖，其機制可能是通過對PI3KPKBAKT信號通路的抑制作用及上調P21的表達而起作用的。

簡介：呼吸道病毒是一組能夠通過呼吸道傳播引起呼吸系統(tǒng)或及其他系統(tǒng)疾病的病原微生物。呼吸道病毒傳染性強可以引起局部暴發(fā)和世界大范圍流行嚴重影響人類健康。由于呼吸道致病微生物感染臨床癥狀相似影像學表現缺乏特異性因此病原學證據在臨床診斷和流行病監(jiān)控中十分重要但目前的檢測方法如病毒分離、病毒抗原檢測和血清學檢測等方法尚不能滿足高效、快速和高通量的要求。季節(jié)性甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒及豬源H1N1流感病毒是致病性強和傳播速度快的常見重要呼吸道病毒亟需可以快速、準確鑒別的檢測方法。目的建立一種可同時檢測四種常見呼吸道病毒的多重RTPCR快速檢測方法。方法1、收集2009年9月至2009年10月在第三軍醫(yī)大學附屬新橋醫(yī)院以急性上呼吸道感染為主要表現的門診患者咽拭子標本。提取病毒RNA通過常規(guī)RTPCR方法進行檢測獲得上感病人常見感染呼吸道病毒病毒學證據2、使用PBSTⅡ質粒作為載體構建包含INFA、INFB、HRV和SOIVS四種病毒目的基因序列的重組子標準品3、通過對反應條件和反應體系的優(yōu)化建立可同時檢測季節(jié)性甲型流感病毒INFA、乙型流感病毒INFB、人鼻病毒HRV和豬源H1N1流感病毒SOIVS的多重RTPCR方法并評價其特異性和敏感性4、應用常規(guī)RTPCR與多重RTPCR方法同時對上感患者咽拭子進行檢測比較兩種方法的檢測效能。結果1、在2009年9月至10月共納入病例36例其中男21例女15例年齡241008歲。在臨床診斷為急性上呼吸道感染的患者咽拭子樣本中檢測到四種呼吸道病毒季節(jié)性甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒、豬源H1N1流感病毒總例數為12例其中季節(jié)性甲型流感病毒檢查陽性3例乙型流感病毒陽性1例人鼻病毒陽性3例豬源H1N1流感病毒陽性5例。在流感病毒感染病例中SOIVS所占比例為556％。2、以PBSTⅡ質粒作為載體構建了包含INFA、INFB、HRV和SOIVS四種病毒目的基因序列的重組子經過定量鑒定和稀釋制各了濃度為101107COPIESML的檢測標準品3、建立了可同時檢測四種病毒的多重RTPCR方法該法可同時或分別擴增INFA212BP、INFB489BP、HRV380BP和SOIVS153BP的基因片段。檢測的敏感性分別為104、104、103、104COPIESML。采用相同的反應體系和反應條件分別對其他6種常見呼吸道病原體包括肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和糞腸球菌核酸進行擴增均未檢測出擴增產物。4、常規(guī)RTPCR與多重RTPCR方法對臨床樣本的檢測陽性一致率為833％經X2檢驗兩種檢測方法的檢測效能無統(tǒng)計學差異。同時進行的吻合系數檢驗提示兩種診斷方法吻合度較強且有統(tǒng)計學意義。結論1、在2009年秋季重慶地區(qū)SOIVS疫情處于流行階段是流感病毒中的優(yōu)勢病毒株。2、本課題構建的此種多重RTPCR檢測方法可用于呼吸道感染患者四種常見呼吸道病毒INFA、INFB、HRV、SOIVS的快速甄別。

簡介：中國河南省上蔡縣等地在九十年代中期因非法采供血曾造成局部地區(qū)有償獻血人群中艾滋病病毒HIV感染流行雖然在采供血機構整頓后經采供血途徑造成HIV感染的流行已得到了有效的控制但已感染的有償獻血員通過性傳播和母嬰傳播途徑在配偶及嬰幼兒中造成HIV感染的二、三代傳播的情況國內未見詳細報道該研究旨在通過血清學調查、問卷調查、縱向研究和分子流行病學研究方法對河南省上蔡縣等地兒童及其家庭開展流行病學研究以闡明當地兒童HIV感染狀況分析流行因素及傳播特點并了解其父母HIV感染狀況、流行因素及其對艾滋病的知識、態(tài)度分析當地艾滋病病毒的亞型分布等從而為制定預防控制策略及措施、預防及阻斷HIV母嬰傳播和性傳播提供依據控制艾滋病在當地的進一步蔓延

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文乙型肝炎病毒X蛋白與著絲粒蛋白A相互作用關系的研究姓名劉莉娜申請學位級別博士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師朱明華20100501乙型肝炎病毒X蛋白與著絲粒蛋白A相互作用關系的研究論文概述乙型肝炎病毒X蛋白與著絲粒蛋白A相互作用關系的研究背景和目的原發(fā)性肝細胞癌PRIMARYHEPATOCELLULARCARCINOMAHCC是世界范圍內的常見惡性腫瘤之一，尤其好發(fā)于亞洲和非洲南部，我國為HCC高發(fā)國家。流行病學資料顯示原發(fā)性肝細胞癌HCC的發(fā)生與肝炎病毒HBV和HCV感染、黃曲毒素攝入、酗酒、飲水污染以及遺傳因素等有關，在我國，乙肝病毒HEPATITISBVIRES，HBV感染是HCC的主要病因之一。乙型肝炎病毒X基因是HBV復制所必需的基因，是HBV病毒基因組中最小的開放讀碼框，編碼序列位于13741838位核苷酸，全長465BP，編碼長度為154個氨基酸的X蛋白HBX。HBX蛋白是一種具有反式激活作用的多功能蛋白，其表達產物不直接作用于雙鏈DNA，而是通過和細胞內的多種蛋白相互作用來調節(jié)細胞的生物學行為。HBX蛋白廣泛參與病毒的復制、宿主細胞的基因調控和表達、蛋白質降解及細胞信號轉導等過程，具有生長因子樣作用可直接刺激細胞生長，并可通過影響正常的細胞周期，干擾DNA的修復以及調節(jié)肝細胞增殖、分化和凋亡，在HBV感染及HCC發(fā)生、發(fā)展中起著重要而復雜的作用。肝癌組織中存在著高頻自發(fā)的HBX基因突變，點突變或缺失突變的HBX蛋白可能發(fā)揮與野生型HBX蛋白不同的功能，羧基端缺失大于14AA的HBX即喪失其反式激活能力。HBX蛋白功能上的差異與其結構有關，缺失突變導致HBX反式激活能力下降，喪失了野生型HBX抗增殖和促進細胞凋亡以及抑制細胞轉化的作用，但對其進一步的基因調控仍知之甚少。本室前期用EDNA芯片和蛋白雙向電泳及質譜分析篩選，發(fā)現著絲粒蛋白ACENTROMEREPROTEINA，CENPA在HBX突變相關的肝癌細胞中高表達，以上結果提示CENPA表達水平的上調與HBX缺失突變具有密切的關系，但HBX是如何上調CENPA表達的機制尚未闡明。CENPA是組蛋白H3樣的變異體，參與調控染色質結

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文EB病毒VCAIGA抗體在鼻咽癌診斷中的應用姓名趙敦勇申請學位級別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學指導教師尹一兵裘玉容20080501重慶醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。學位論文作者簽名學位論文版權使用授權書本人完全了解重慶醫(yī)科大學有關保護知識產權的規(guī)定，即研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產權單位屬重慶醫(yī)科大學本人保證畢業(yè)高校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為重慶醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱學校可以公布學位論文的全部或部分內容保密內容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文論文作者簽名，蕊塞嘉指導教師簽名，主生日期墨塑￡二

簡介：巴泰病毒（BATAIVIRUS，BATV）是布尼亞病毒科（BNUYAVIRUS）布尼亞病毒屬（BUNYAVIRUS）布尼亞姆韋拉（BUNYAMWERA）血清組病毒成員之一。該病毒為20世紀50年代首先分離自馬來西亞捕獲的庫蚊標本，隨后在歐亞等地區(qū)多種蚊蟲標本中分離到。在日本牛血清、印度家豬血清和蘇丹發(fā)熱病人血清標本中也分離到該病毒，并證實巴泰病毒感染可引起發(fā)熱，甚至病毒性腦炎癥狀。19971998年東非發(fā)生十余萬不明原因發(fā)熱病例，從病人標本分離到病毒，分子生物學檢測結果顯示為巴泰病毒與BUNYAMWERA病毒基因重配（GEICREASSTMENT）形成的新毒株NGARI病毒，引起國際社會極大關注。我國學者于1998年在云南省思茅地區(qū)捕獲的菲律賓按蚊中分離到一株病毒（YN924株），血清學試驗證實該病毒與布尼亞病毒屬及該屬的巴泰病毒免疫腹水均有高滴度反應。隨后對其S片段進行序列測定，同源性分析和系統(tǒng)進化分析進一步證實YN924株為巴泰病毒。為全面了解我國巴泰病毒分離株分子生物學特征，本研究采用RTPCR和TAILPCR方法，首次對我國分離的巴泰病毒（YN924株）基因組全編碼區(qū)進行序列測定和分析。結果顯示，YN924株病毒基因組由S、M、L三個片段組成，長度分別為947、4371、6860個核苷酸。其中，S片段基因組編碼由234個氨基酸組成核衣殼蛋白和由102個氨基酸組成非結構蛋白，M片段基因組編碼由1435個氨基酸組成的前體蛋白，L片段基因組編碼由2239個氨基酸組成的RNA聚合酶。與國外其它地區(qū)巴泰病毒分離株進行基因組全編碼區(qū)序列比較發(fā)現，YN924株與日本牛血清分離株（ON7B01株）S、M片段核苷酸（氨基酸）同源性均最高，分別為977％（100％）和957％（98％）；由于本研究是首次開展巴泰病毒L基因片段核苷酸序列研究，國際基因庫尚無可參考的序列信息，本研究比較了我國分離的巴泰病毒與同一血清組代表病毒BUNYAMWERA病毒的L片段，進行核苷酸和氨基酸序列同源性比較，分別為735％和816％。系統(tǒng)進化分析顯示，YN924株基因組與其它巴泰病毒分離株在各自分支下形成獨立分支。本研究提示我國分離的巴泰病毒YN924株未發(fā)生基因重配（如NGARI病毒），病毒基因組與日本牛血清分離株（ON7B01株）親緣關系密切。本研究得到巴泰病毒YN924株三個片段完整編碼區(qū)序列，是世界上首株完成基因組全編碼區(qū)序列測定的巴泰病毒，也是布尼亞姆韋拉血清組已登記的24種病毒中第二株有基因組全編碼區(qū)序列的病毒，對我們研究巴泰病毒或者布尼亞姆韋拉血清組的病毒都有積極意義。

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文人乳頭瘤病毒基因分型在子宮頸病變篩查中的應用姓名楊國溜申請學位級別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學（檢驗）指導教師馮文莉20100501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文更加個體化的方案。關鍵詞人乳頭瘤病毒，基因芯片，宮頸癌

簡介：目的探討HBV及其抗原成份對Α干擾素（IFN?。┛共《净钚钥赡艽嬖诘霓卓箼C制。方法逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR）檢測IFNΑ處理的HEPG2215細胞在不同處理時間點的STAT1、STAT2、IRF9MRNA表達水平，并比較分析干擾素抗病毒蛋白MXAMRNA在HEPG2和HEPG2215細胞中的表達；以表達抗病毒蛋白MXA的重組質粒PCDNA31FLAGMXAWILDTYPE轉染肝胚瘤細胞株HEPG2215細胞，采用ELISA和REALTIMEPCR法分別檢測轉染的HEPG2215細胞上清HBV抗原和細胞外HBVDNA；將HBV核心蛋白表達質粒（PHBCEGFP）轉染HEPG2細胞，通過RTPCR法分析IFNΑ抗病毒蛋白MXA、PKR和25OASMRNA表達水平。結果研究發(fā)現IFNΑ處理后HEPG2215細胞STAT1、STAT2、IRF9MRNA表達水平明顯升高，抗病毒蛋白MXAMRNA在HEPG2215細胞中未被檢測到，而在HEPG2細胞中卻能表達；轉染MXA重組質粒的HEPG2215細胞能夠表達MXA，并顯示MXA具有一定的抗HBV活性；進一步研究發(fā)現在轉染HBV核心蛋白（HBC）表達質粒的HEPG2細胞中，抗病毒蛋白PKR和25OASMRNA表達水平未見明顯改變，而MXAMRNA表達水平顯著降低。結論HBV及其抗原成份（HBC）并不影響Α干擾素的JAKSTAT信號轉導途徑分子MRNA的表達，但可影響抗病毒蛋白如MXAMRNA的表達，進而拮抗IFNΑ抗病毒活性。

簡介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV感染不僅引起急、慢性病毒性肝炎，而且與肝纖維化和肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展進程密切相關。病毒感染肝細胞后，病毒的核酸、蛋白與肝細胞的核酸、蛋白等生物大分子之間的相互作用是病毒致病的主要分子機制之一。HCV基因組長約96KB，含有一個長的開放閱讀框架F，編碼一個約3010～3033個氨基酸殘基AA的多蛋白前體，經宿主細胞信號肽酶和病毒蛋白酶加工成至少十種結構蛋白和非結構蛋白，C、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。目前還發(fā)現核心蛋白C的編碼基因通過移框從而編碼一種新的17KD的F蛋白，這些蛋白在病毒的復制和繁殖中各有不同的功能，但某些具體機制尚不清楚。本研究以兩個非結構蛋白NS4A、NS4B為研究對象，旨在探討HCVNS4A和NS4B蛋白對肝細胞基因表達譜的調節(jié)及與肝細胞蛋白之間的相互作用，對于了解HCVNS4A、NS4B蛋白的致病機制及尋找有效防治HCV的方法具有重要意義。為研究NS4A、NS4B蛋白的反式激活功能，我們構建了NS4A、NS4B的真核表達載體PCDNA31NS4A和PCDNA31NS4B，分別將其與氯霉素乙酰轉移酶報告基因表達質粒PCAT3PROMOTER含有SV40早期啟動子共轉染人肝癌細胞系HEPG2，用酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測細胞中氯霉素乙酰轉移酶CAT基因的表達活性；以表達質粒PCDNA31NS4A和PCDNA31NS4B轉染HEPG2細胞，空載體PCDNA31為平行對照，制備轉染后的細胞裂解液，應用抑制性消減雜交技術SUPPRESSIONSUBTRACTIVEHYBRIDIZATION，SSH，構建HCVNS4A、NS4B反式激活相關基因差異表達的CDNA消減文庫，對篩選的克隆進行測序及同源性分析。結果發(fā)現，NS4A、NS4B能夠反式激活SV40啟動子的轉錄活性，進而促使其調控的下游CAT基因表達增強，NS4B的反式激活作用強于NS4A。消減雜交分析顯示，NS4A、NS4B能夠上調肝細胞中多種基因的表達，包括與細胞生長調節(jié)、細胞內信號轉導、蛋白質翻譯合成、腫瘤發(fā)生及物質代謝密切相關的蛋白編碼基因；此外，我們還篩選到兩個新基因，分別命名為NS4A反式激活基因NS4ATP1和NS4ATP2，GENBANK號分別為AY740521和AY846876。為篩選NS4A、NS4B的肝細胞結合蛋白，我們分別構建了NS4A、NS4B的酵母表達載體PGBKT7NS4A和PGBKT7NS4B，并轉化酵母細胞AH109，以SDSPAGE和WESTERNBLOTTING分析蛋白表達。以NS4A、NS4B為誘餌蛋白，應用酵母雙雜交技術，在肝細胞文庫中釣取NS4A、NS4B的肝細胞結合蛋白。結果發(fā)現NS4A、NS4B在AH109酵母細胞中成功表達出相對分子量為27KD和48KD的融合蛋白。雙雜交結果顯示，NS4A可與7種肝細胞蛋白相互作用，包括金屬硫蛋白、真核翻譯延伸因子1Α、血清白蛋白、RNA結合基序蛋白、肌漿球蛋白結合蛋白、細胞色素C氧化酶Ⅱ及NAKATP酶Β1亞基。NS4B可與5種肝細胞蛋白相互作用，包括NADH脫氫酶亞單位3、細胞色素C氧化酶Ⅲ、視黃醇結合蛋白4、神經內分泌特異性蛋白及纖維蛋白原Γ多肽。上述結果提供了HCVNS4A、NS4B蛋白在體內可能存在的調控機制的線索。我們進一步對兩個新基因功能進行了初步探討。將分子生物學技術與生物信息學技術相結合，首先從人肝癌細胞中成功克隆并鑒定了NS4ATP1和NS4ATP2基因的全長編碼序列。基于原核表達系統(tǒng)具有操作簡單、成本低、表達蛋白量高等優(yōu)點，我們利用PET32A原核表達載體和相應的BL21DE3菌株，在體外成功表達了NS4ATP1和NS4ATP2蛋白。鑒于酵母中表達的蛋白質能在酵母細胞中正確折疊與翻譯后修飾，我們又構建了NS4ATP1和NS4ATP2的酵母表達載體，并在酵母細胞中成功表達了相應的融合蛋白。上述結果為下一步兩種新蛋白具體的生物學功能、基因表達調控的深入研究提供了基礎。

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